L’interaction spécifique entre la biotine et l’avidine (streptavidine) en fait un excellent outil pour faciliter la détection, la purification et l’immobilisation des protéines.
Cette technologie polyvalente est retenue dans une large gamme d’applications :
- ELISA pour la quantification des protéines,
- FACS pour détecter / isoler les cellules,
- Biopanning pour la sélection de méthode d’expression phagique,
- SPR pour étudier la cinétique de liaison aux protéines,
- Immunocapture et enrichissement pour isoler les anticorps du plasma ou d’un autre liquide biologique.
Cependant, des protéines biotinylées de haute qualité présentent un défi majeur à générer. Pour surmonter les problèmes techniques tels qu’un marquage insuffisant, une variation élevée d’un lot à l’autre et des performances imprévisibles, ACROBiosystems a développé une collection exclusive de protéines recombinantes biotinylées pré-marquées et validées expérimentalement. La collection de protéines biotinylées MABsol® comprend plus d’une centaine de cibles médicamenteuses et de protéines biomarqueurs couramment étudiées.
Ces protéines recombinantes de haute qualité sont plus proches de la conformation et des modifications naturelles en tant que matières premières. La collection de protéines biotinylées comprend deux séries de produits uniques et complémentaires :
1. Série PrecisionAvi avec technologie Avitag™ prête à l’emploi – peptide unique de 15 acides aminés
Cette technique de marquage enzymatique en un seul point apporte de nombreux avantages pour les tests de liaison couramment utilisés.
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2. Série UltraLys avec méthode de marquage chimique à la biotine développée en interne pour une sensibilité de détection ultra
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Principales caractéristiques
1. Plus proche de la conformation et des modifications naturelles
La production des protéines biotinylées est réalisée à l’aide de la plateforme d’expression propriétaire HEKMax®. En tant qu’hôtes d’expression, les cellules HEK293 humaines présentent de nombreux avantages par rapport à d’autres types de cellules, comme résumé dans le tableau ci-dessous.
Systèmes d’expression | Conformation | Phosphorylation | Traitement protéolytique | Glycosylation |
E. Coli | + | N/A | N/A | N/A |
Cellule d’insecte | ++ | ++ | ++ | Faible |
Cellule de plante | +++ | +++ | +++ | Faible |
Cellule CHO | ++++ | ++++ | ++++ | Non identique à l’humain |
Cellule humaine | +++++ | +++++ | +++++ | Humain authentique |
2. Haute bioactivité et sensibilité de détection
La bioactivité des protéines biotinylées est déterminée à la fois par la structure de la protéine elle-même et par la manière dont la biotinylation est effectuée. Pour chaque protéine, plusieurs options de marquage et de méthodes de biotinylation sont testées. Et les produits sont évalués dans un ensemble de tests de liaison. Seuls ceux qui présentent les meilleures performances sont sélectionnés pour la production. La figure 1 est un exemple des expériences d’évaluation interne.
Fig.1 Activité de liaison de différentes formes de PD-1 biotinylé évaluée dans un ELISA fonctionnel contre rhPD-L1 (Cat. No. PD1-H5258 )
Ces protéines biotinylées présentent une bioactivité élevée et une superbe sensibilité de détection dans différentes applications. En ELISA fonctionnel, le BCMA humain biotinylé a une activité de liaison élevée avec le BAFF comme le montre la figure 2. La figure 3 montre que le PD-1 biotinylé peut être bien appliqué à l’AlphaLISA pour détecter l’activité de liaison avec son ligand PD-L2. La figure 4 montre que la protéine biotinylée peut être facilement utilisée pour déterminer l’affinité entre la protéine et l’anticorps thérapeutique dans le dosage SPR. En outre, les protéines biotinylées sont souvent utilisées dans des tests cellulaires, tels que le test de cytotoxicité et l’évaluation de l’expression CAR (Fig. 5 & Fig. 10).
ELISA
Fig. 2 BAFF humain immobilisé, Fc Tag (Cat. No. BAF-H4268) à 5μg/mL (100μL/puits) peut se lier au BCMA humain biotinylé, Fc Tag Cat.No. BC7-H82F0) avec une gamme linéaire de 0.12-1.95ng/mL.
AlphaLISA
Fig. 3 PD-1 humain biotinylé (Cat. No. PD1-H82F1) à 1μg/mL (5μL/puits) peut se lier sur le PD-L2 humain (Cat. No. PD2-H5220) avec une gamme linéaire de 0.02-0.625μg/mL.
SPR
Fig.4 La constante d’affinité de la protéine CD19 humaine est de 0,255nM, comme vérifié par SPR CD19 humain biotinylé (20-291), His,Avitag (Cat. No. CD9-H82E9) capturé sur Biotin CAP – La puce de capteur série S peut se lier au MAb FMC63 (lgG2a de souris) avec une constante d’affinité de 0,255nM, comme déterminé par le test SPR (Biacore 8K) (test de CQ).
Dosage cellulaire
Fig. 5 TNF-alpha humain recombinant (Cat. No. TNA-H82E3) induit un effet de cytotoxicité sur les cellules WEH1-13VAR en présence de l’inhibiteur métabolique actinomycine D. L’EC50 pour cet effet est de 0,014-0,029ng/mL. Le résultat montre que le TNF-alpha humain biotinylé est conforme avec le TNF-alpha nu dans le test de cytotoxicité.
En savoir plus :
- Rechercher un produit des séries :
– PrecisionAvi (AviTag)
– UltraLys (marquage chimique) - N’hésitez pas à nous consulter pour bénéficier de nos années d’expérience
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